薄層色譜儀在相同的實(shí)驗(yàn)條件下,能夠得到重復(fù)性較好的結(jié)果。這有助于研究人員驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性和可靠性,可以通過顯色劑或紫外燈等手段使斑點(diǎn)顯色,從而直觀地觀察到分離結(jié)果。這有助于研究人員快速判斷樣品的純度和成分,適用于多種類型的化合物分離和定性分析,包括有機(jī)化合物、無機(jī)化合物、生物大分子等。這使得它在化學(xué)、生物化學(xué)、醫(yī)藥等多個(gè)領(lǐng)域都得到了廣泛的應(yīng)用。
薄層色譜儀的測定步驟:
-選擇合適的玻璃板,要求光滑、平整,洗凈后不附水珠,晾干。
-根據(jù)需要選擇合適的固定相,如硅膠和適當(dāng)?shù)恼澈蟿?如羧甲基纖維素鈉水溶液)混合制成勻漿。
-將固定相涂布于玻璃板上,一般可涂成0.2~0.3mm厚的薄層。
-涂布后的薄層板需在室溫下晾干,然后在110℃烘30分鐘左右,再置于有干燥劑的干燥箱中備用。
-在距薄層板底邊2.0cm處劃一條基線,作為點(diǎn)樣的起始位置。
-用點(diǎn)樣器或毛細(xì)管吸取適量樣品溶液,小心地在薄層板上進(jìn)行點(diǎn)樣,形成直徑不超過5mm的圓點(diǎn)。
-點(diǎn)樣時(shí)應(yīng)注意勿損傷薄層表面,并保持點(diǎn)樣量適中,以免影響分離效果。
-在展開缸中加入適量的展開劑,預(yù)先飽和一段時(shí)間。
-將點(diǎn)好樣的薄層板放入展開缸中,浸入深度為距薄層板底邊0.5~1.0cm(切勿將樣點(diǎn)浸入展開劑中)。
-密封缸蓋,待展開至規(guī)定距離(一般為10~15cm)后取出薄層板。
-展開結(jié)束后,取出薄層板并立即用鉛筆畫下溶劑前沿位置。
-根據(jù)化合物的特性選擇適當(dāng)?shù)娘@色方法,如紫外光照射、碘蒸汽熏蒸或噴灑顯色劑等。
-在規(guī)定的波長下觀察斑點(diǎn)顏色,測量比移值(Rf),并進(jìn)行記錄。